早期使用隔膜和停流進們器,裝在色譜柱入口處?,F(xiàn)在大都使用六通進樣閥或自動進樣器。進樣裝置要求:密封性好,死體積小,重復性好,保證中心進樣,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。進樣方式可分為:隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。
1.隔膜進樣。用微量注射器將樣品注入專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內(nèi),可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,死體積幾乎等于零,可以獲得*的柱效,且價格便宜,操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPA以上);此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應,使進樣重復性只能達到1~2%;加之能碉各種溶劑的橡皮不易找到,常規(guī)分析使用受到限制。
2.停流進樣??杀苊庠诟邏合逻M樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點是保留時間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中,效果較好。
3.閥進樣。一般HPLC分析常用六通進樣閥(以美國RHEODYNE公司的7725和7725I型zui常見),其關鍵部件由圓形密封墊子(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積在存在,柱效率低于隔膜進樣(約下降5~10%左右),但耐高壓(35~40MPA),進樣量準確,重復性好(0.5%),操作方便。
4.自動進樣。用于大量樣品的常規(guī)分析。
進樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。
1、用部分裝液法進樣時,進樣量應不大于定量環(huán)體積的50%(zui多75%),并要求每次進樣體積準確、相同。此法進樣的準確度和重復性決定于注器取樣的熟練程度,而且易產(chǎn)生由進樣引起的峰展寬。
2、用*裝液法進樣時,進樣量應不小于定量環(huán)體積的5~10倍9zui少3倍),這樣才能*置換定量環(huán)內(nèi)和流動相,消除管壁效應,確保進樣的準確度及重復性。
使用和維護注意事項:
?、贅悠啡芤哼M樣前必須用0.45UM濾膜過濾,以減少微粒對進樣閥的磨損。
?、谵D(zhuǎn)動閥芯時不能太慢,更不能停留在中間位置,否則流動相受阻,使泵內(nèi)壓力劇增,甚至超過泵的zui大壓力;轉(zhuǎn)到進樣位時,過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩沖鹽和樣呂殘留在進樣閥中,每次分析結(jié)束后應沖洗進樣閥。通??捎盟疀_洗,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,再用水沖洗。